PCR是一種敏感和有效的方法,用于在短時(shí)間內(nèi)將單拷貝的目標(biāo)DNA序列擴(kuò)增至數(shù)百萬(wàn)拷貝。因此用于PCR反應(yīng)的PCR板必須避免存在污染物和抑制劑,同時(shí)又具有可保障PCR效果的高質(zhì)量。
那么如何選擇合適的耗材以獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)呢?
PCR板通常由聚丙烯制成,因?yàn)樗嵌栊缘牟⑶夷軌虺惺軣嵫h(huán)過(guò)程中溫度的快速變化。聚丙烯的惰性性質(zhì)使其對(duì)于反應(yīng)物質(zhì)的吸收降低至小,確保獲取PCR結(jié)果。
為了進(jìn)一步保障在純度和生物兼容性方面的批次間一致性,應(yīng)當(dāng)在生產(chǎn)過(guò)程中使用全新未循環(huán)使用的醫(yī)學(xué)級(jí)或分子生物學(xué)級(jí)高品質(zhì)聚丙烯原料。請(qǐng)注意,某些PCR邊框用更強(qiáng)的聚碳酸酯框制成,以與高通量機(jī)器人應(yīng)用兼容。
PCR管和板通??商峁┒喾N不同的顏色形式,以便于對(duì)于樣品的視覺區(qū)分和鑒別,特別是在高通量實(shí)驗(yàn)中。盡管耗材的顏色對(duì)DNA擴(kuò)增沒有影響,但在設(shè)置實(shí)時(shí)PCR板的反應(yīng)時(shí),與透明耗材相比,我們更推薦使用白色耗材,以實(shí)現(xiàn)靈敏和準(zhǔn)確的熒光檢測(cè)。
白色耗材通過(guò)阻止熒光折射出管來(lái)提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性。折射被小化時(shí),更多的信號(hào)被反射回檢測(cè)器,從而增加信噪比。
此外,白色管壁可阻止熒光信號(hào)傳遞至PCR儀模塊,避免被吸收或不一致地反射熒光信號(hào),從而使重復(fù)實(shí)驗(yàn)中的差異降低。在少數(shù)情況下,如果熒光探測(cè)器由于白色孔的信號(hào)反射增強(qiáng)而過(guò)飽和,可以使用磨砂孔替代。